Fluo{0}} AM Fluorescent Calcium Lon Detection Kit

Fluo-4 je vylepšená verze Fluo-3 běžně používaná v biologických experimentech detekce vápenatých iontů. Hlavním rozdílem je, že dva atomy chloru na molekule Fluo-3AM jsou nahrazeny fluorem na Fluo-4AM a malá změna ve struktuře může způsobit rychlejší načítání Fluo-4AM a detekční signál je silnější při stejné koncentraci. Protože skupina AM sondy Fluo-4AM nejen pokrývá molekulární část Fluo-4 chelátovaného vápníku, ale také zvyšuje jeho hydrofobnost, může snadno proniknout membránou živé buňky a vstoupit do buňky. Když Fluo-4AM vstoupí do buňky, bude laktázou přichycena do Fluo-4, takže zůstane v buňce. Fluo-4 samo o sobě má malou fluorescenci, ale v kombinaci s intracelulárními ionty vápníku může produkovat silnou fluorescenci. Intenzita fluorescence je úměrná obsahu intracelulárního vápníku.

Tato sada je založena hlavně na výše uvedených principech detekce, Fluo{0}}AM jako hlavní části, a poskytuje speciální vyrovnávací pufr, snadno použitelný a citlivější detekci. Obsah vápenatých iontů v živých buňkách nebo dynamickou změnu vápenatých iontů v buňkách lze měřit fluorescenčním mikroskopem, průtokovým analyzátorem, enzymovým značením atd.

Loď se suchým ledem; Skladujte při teplotě -20 stupňů mimo dosah světla, platnost 12 měsíců.

Poznámka: Výše ​​uvedené reakční doby soupravy odpovídají testovacímu systému 96-jamkových destiček.

1. Příprava před experimentem: Buňky se naočkují do 96-jamkových destiček a předem se ošetří podle experimentálního účelu;

2. Konfigurace pracovního roztoku Fluo-4 AM: Připravte si pracovní roztok Fluo-4 AM podle potřeby, konfigurační systém lze odkázat na následující tabulku, všimněte si, že různé charakteristiky buněk se liší podle aktuální situaci experimentu lze přidat nebo snížit koncentraci použité sondy, počáteční doporučený poměr ředění 1:500;

3. Barvící markery (příkladem jsou adherentní buňky; suspenzní buňky vyžadují pokaždé výměnu tekutiny, proto prosím proveďte centrifugaci sami):

3.1. Odstraňte původní buněčné kultivační médium a promyjte buňky 2-3krát PBS nebo jinými pufry;

3.2. Odstraňte promývací pufr, do každé jamky přidejte 100 μL pracovního roztoku Fluo{3}} AM a inkubujte v buněčném inkubátoru při 37 stupních po dobu 30 minut mimo světlo;

3.3. Na konci inkubace odstraňte pracovní roztok Fluo-4 AM a promyjte buňky 2-3krát pomocí PBS nebo jiných pufrů;

3.4. Nahraďte detekčním pufrem vápenatých iontů a pokračujte v inkubaci 15-30min, abyste zajistili adekvátní hydrolýzu Fluo-4AM v buňkách (volitelné);

4. Detekce fluorescence: Pro její detekci použijte fluorescenční mikroskop, enzymový marker a další nástroje. Fluo-4 AM je zelená fluorescenční s EX/EM ≈ 494/528 nm.

1. Vzhledem k různým mezibuněčným vlastnostem a různým metodám předběžného ošetření jsou poměr použití sondy a inkubační doba popsané v krocích pouze orientační a lze je upravit podle konkrétních okolností.

2. Fluorescenční barviva mají problémy se zhášením, věnujte prosím pozornost tomu, abyste se vyhnuli provozu světla, aby se zpomalilo zhášení fluorescence.

3. Fluo-4AM je velmi citlivý na vlhkost, proto jej prosím při prvním použití řádně zabalte podle experimentálního uspořádání. Pracovní roztok testu Fluo-4 AM by měl být připraven k použití.

4. Určité sraženiny po rozmrazení jsou normálním jevem a před použitím se důkladně protřepou, aby se zajistilo úplné rozpuštění.

5. Na základě principu činnosti této sondy není možné ošetřovat buňky jako fixace nebo perforace.

6. Pro své zdraví a bezpečnost noste během provozu laboratorní plášť a rukavice.

Pouze pro výzkumné účely!

Populární Tagy: Fluo-4 am fluorescenční souprava pro detekci vápníku, Čína fluo-4 am fluorescenční souprava pro detekci vápníku, výrobci, dodavatelé, továrna