Magnetické agarózové kuličky SweMagrose IDA-Co pro čištění proteinů His-Tag

 

Název produktu	Kočka. Žádný.	Spec.
Magnetické agarózové kuličky SweMagrose IDA-Co pro čištění proteinů His-Tag	G3655-1ML	1 ml
	G3655-5ML	5 ml

 

 

Tento produkt je připraven z agarózových magnetických kuliček modifikovaných IDA a chelatujících iontů niklu. Dokáže účinně a rychle čistit histidinem značené proteiny v biologických vzorcích bez odstředivé filtrace. Operace je jednoduchá a vhodná pro purifikaci rozpustných histidinových tag proteinů exprimovaných v supernatantu nebo buňkách bakterií, kvasinek a buněk. Může být také kombinován s vysoce výkonným zařízením na čištění proteinů pro screening a separaci proteinů.

Co2+ má 4 ligandy a méně nespecifické adsorpce, Ni2+ má 6 ligandů a silnou schopnost vázat proteiny, pro více cílových proteinů si můžete vybrat naše další magnetické agarózové kuličky SweMagrose IDA-Ni pro His - Purifikace proteinu značky (G3654).

 

 

Loď s mokrým ledem; Skladujte při 4 stupních, platnost 12 měsíců.

 

 

Číslo součásti	Komponent	G3655-1ML	G3655-5ML
G3655	Magnetické agarózové kuličky SweMagrose IDA-Co pro čištění proteinů His-Tag	1 ml	5 ml
Manuál		1ks

 

 

1. Konfigurace různých činidel může být popsána následovně. Uživatelé si mohou vybrat vhodné množství magnetických kuliček a složení pufru podle situace reagencií.

Komponent	Objem
10 x PBS (200 mM fosforečnan sodný, pH 7,4)	50 ml
10x Imidazolový pufr (200 mM fosforečnan sodný, 5 M imidazol, pH 7,4)	50 ml
Odstraňovač kobaltu (10 mM Tris-HCl, 500 mM NaCl, 100 mM EDTA, pH 7,4)	10 ml
Alkalický promývací roztok (0,5 M NaOH, 2 M NaCl)	10 ml
href="javascript:;" Síran kobaltnatý (100 mM CoSO4)	15 ml
Konzervační roztok (20% ethanol)	50 ml

 

2. Konfigurace vyrovnávací paměti

Vazebný výkon cílového proteinu s kuličkami chelatujícími kovové ionty přímo ovlivní účinnost čištění cílového proteinu a různé pufry také do určité míry ovlivní výtěžek a čistotu cílového proteinu. Proto by uživatelé před purifikací proteinů ve velkém měřítku měli navrhnout své vlastní experimenty pro screening pufrů vhodných pro cílový protein, včetně vazebného pufru, promývacího pufru a elučního pufru. Níže uvedený pufrový systém je vhodný pro purifikaci většiny proteinů histidinových značek. pro uživatelskou referenci.:

Vazebný pufr: 20 mM fosforečnan sodný, 500 mM NaCl, 5~50 mM imidazol, pH 7,4

Promývací pufr: 20 mM fosforečnan sodný, 500 mM NaCl, 50~100 mM imidazol, pH 7,4

Eluční pufr: 20 mM fosforečnan sodný, 500 mM NaCl, 500 mM imidazol, pH 7,4

3. Ošetření vzorku

a) E. coli, kvasinky a další intracelulárně exprimované proteiny: přidejte 5~10 ml vazebného pufru na gram buněk, přidejte inhibitor proteázy (např. PMSF v konečné koncentraci 1 mM), resuspendujte buňky a lyzujte je ultrazvukem. buňky v ledové lázni, tj. vzorek surového proteinu. Pokud je vzorek příliš viskózní, lze k surovému vzorku podle potřeby přidat vhodné množství nukleázy a umístit na led na 30 minut, aby došlo k degradaci nukleových kyselin. Alternativně lze podle potřeby provést centrifugaci vzorku proteinu.

b) Extracelulárně exprimovaný protein: Vzorek surového proteinu byl získán, když byl extracelulární expresní supernatant zředěn stejným množstvím vazebného pufru.

c) Intracelulárně exprimované proteiny v živočišných buňkách: Odeberte vhodné množství živočišných buněk, jednou promyjte vhodným množstvím PBS (samo poskytnutý), odstraňte supernatant, resuspendujte s vhodným množstvím vazebného pufru obsahujícího 1 % (v/v) Triton X -100 nebo 1 % (v/v) NP-40, přidejte inhibitor proteázy (např. PMSF v konečné koncentraci 1 mM) a nasaďte ledem po dobu 10 minut, což je vzorek surového proteinu.

4. Vazba cílového proteinu na magnetické kuličky:

a) Suspendujte 2 g vlhké hmotnosti organismů s 10 ml vazebného pufru a po fragmentaci a lýze se vzorek cílového surového proteinu přidá do centrifugační zkumavky obsahující předem upravené magnetické kuličky a zkumavka se umístí do vortexový mixér a protřepává se po dobu 15 sekund. Vzorek cílového surového proteinu se poté přidá do centrifugační zkumavky s předem upravenými magnetickými kuličkami.

b) Umístěte centrifugační zkumavku na rotační mixér na 20-30 min při pokojové teplotě (v případě potřeby lze otáčet a míchat 1 h při nízké teplotě 2-8 stupňů, aby se zabránilo degradaci cílového proteinu) .

c) Umístěte centrifugační zkumavku na magnetický separátor pro separaci, přeneste supernatant do nové centrifugační zkumavky pro následné testování a centrifugační zkumavku vyjměte z magnetického separátoru pro následné promývací kroky.

5. Mytí magnetických kuliček:

a) Přidejte 10 ml promývacího pufru do centrifugační zkumavky obsahující magnetické kuličky, jemně zkumavku několikrát otočte, aby se kuličky resuspendovaly, magneticky je oddělte a promývací roztok přeneste do nové centrifugační zkumavky pro odběr vzorků. Opakujte tento postup jednou.

b) Přidejte 10 ml promývacího pufru do centrifugační zkumavky obsahující magnetické kuličky, aby se kuličky resuspendovaly, přeneste suspenzi kuliček do nové centrifugační zkumavky (aby se zabránilo kontaminaci cílových proteinů nespecificky adsorbovanými proteiny na stěně původní centrifugační zkumavky ), magneticky separujte a napipetujte supernatant do sběrné zkumavky promývacího pufru.

6. Eluce cílového proteinu

a) Uživatelé mohou upravit koncentraci cílového proteinu změnou elučního objemu podle potřeby. Přidejte 2-10 ml elučního pufru, jemně zkumavku několikrát otočte, aby se kuličky suspendovaly, kuličky magneticky oddělte a eluát shromážděte do nové centrifugační zkumavky, což je vzorek purifikovaného cílového proteinu.

a) V případě potřeby zopakujte výše uvedené kroky jednou, abyste odebrali vzorek do nové centrifugační zkumavky a otestovali, zda je cílový protein zcela eluován.

b) Detekce cílového proteinu pomocí SDS-PAGE nebo Western blotu. Pokud potřebujete změřit koncentraci proteinu, můžete použít Elution Buffer k vynulování koncentrace nebo použít dialýzu nebo ultrafiltraci k odstranění imidazolu a poté změřit koncentraci.

7. Dodatečné zpracování magnetických kuliček

a) Přidejte 5 ml elučního pufru do centrifugační zkumavky obsahující magnetické kuličky, několikrát zkumavku otočte nahoru a dolů, aby se kuličky suspendovaly, magneticky je oddělte a odstraňte supernatant.

b) Opakujte výše uvedené kroky dvakrát.

c) Přidejte 5 ml ddH O do centrifugační zkumavky obsahující magnetické kuličky, několikrát zkumavku otočte nahoru a dolů, aby se kuličky suspendovaly, magneticky je oddělte a odstraňte supernatant.

d) Opakujte výše uvedené kroky dvakrát.

e) Přidejte konzervační roztok k magnetickým perličkám, abyste získali celkový objem 5 ml, skladujte při 2-30 stupních (pro dlouhodobé skladování umístěte při 2-8 stupních) a lze je použít pro další purifikace stejného proteinu.

8. Regenerace magnetických částic

Pokud jsou magnetické kuličky používány nepřetržitě 3 nebo vícekrát, schopnost vázat cílové proteiny může být výrazně snížena a doporučuje se provést proces regenerace magnetických kuliček. Jako příklad vezměte 5 ml 10% (obj./obj.) suspenze magnetických kuliček, abyste detailně ilustrovali operaci regenerace magnetických kuliček.

a) Suspenze magnetických kuliček byla magneticky oddělena, odstraňte supernatant a vyjměte centrifugační zkumavku z magnetického separátoru, přidejte 5 ml ddH2O do centrifugační zkumavky a několikrát otočte centrifugační zkumavku nahoru a dolů, aby se magnetické kuličky resuspendovaly , magneticky separujte a odstraňte supernatant.

b) Přidejte 5 ml odstraňovače kobaltu, otočte centrifugační zkumavku několikrát nahoru a dolů, aby se magnetické kuličky resuspendovaly, otáčejte a míchejte po dobu 5 minut při pokojové teplotě, magneticky oddělte a odstraňte supernatant. Opakujte tento krok jednou.

c) Přidejte 5 ml ddH2O do centrifugační zkumavky obsahující magnetické kuličky, několikrát zkumavku otočte nahoru a dolů, aby se kuličky suspendovaly, magneticky je oddělte a odstraňte supernatant.

d) Alkalické ošetření (volitelný krok): přidejte 5 ml alkalického promývacího pufru, několikrát otočte centrifugační zkumavku nahoru a dolů, aby se kuličky resuspendovaly, otáčejte a míchejte po dobu 5 minut při pokojové teplotě, magneticky oddělte a odstraňte supernatant. Přidejte 5 ml ddH2O, otočte centrifugační zkumavku několikrát nahoru a dolů, aby se kuličky resuspendovaly, magneticky oddělte a odstraňte supernatant. Krok promývání ddH2O opakujte 3-5krát, dokud nebude promývací roztok neutrální.

e) Přidejte 5 ml chloridu nikelnatého, otočte centrifugační zkumavku několikrát nahoru a dolů, aby se kuličky resuspendovaly, otáčejte a míchejte 20 minut při pokojové teplotě, magneticky oddělte a odstraňte supernatant.

f) Přidejte 5 ml ddH2O a několikrát otočte centrifugační zkumavku nahoru a dolů, aby se kuličky resuspendovaly, magneticky oddělte a odstraňte supernatant. Tento krok opakujte 4krát.

g) Přidejte konzervační roztok k magnetickým perličkám, abyste získali celkový objem 5 ml a skladujte při 2-30 stupních (pro dlouhodobé skladování umístěte při 2-8 stupních).

 

 

1. Tento produkt je skladován ve 20% etanolu a před použitím by měl být vyměněn.

2. Korálky nezmrazujte ani nesušte, protože to může ovlivnit konečné použití.

3. Použijte s odpovídajícím magnetickým rámem.

 

Pouze pro výzkumné použití. Není určeno pro diagnostické nebo terapeutické postupy!

 

 

Populární Tagy: Magnetické agarózové kuličky swemagrose ida-co pro čištění proteinů his-tag, Čína magnetické agarózové kuličky swemagrose ida-co pro čištění proteinů his-tag výrobci, dodavatelé, továrna